《分子生物学实验》教学大纲

 《分子生物学实验》教学大纲

课程名称：分子生物学实验

课程编号：

总学时数：36

学    分：1

适用对象：生物科学专业（四年制普通本科）

一、课程性质和教学目标

分子生物学实验课是一门独立的专业课程。 本课程以实践环节为主，由验证性、综合性和设计性等12项实验内容构成，目的在于使学生掌握分子生物学基本理论指导下的实验技能、熟悉实验设备的操作方法，学习规范化的实验操作技能，初步具备应用现代生物技术的手段研究生物大分子的能力，培养学生发现问题和解决问题的能力和求实创新的科学精神。

二、实验项目名称和学时分配

三、单项实验的内容和要求

（一）分子生物学实验安排及试剂配制（8人/组）

1．教学内容：1. 了解分子生物学实验的基本原理，实验室基本知识和实验仪器的基本使用方法。

2．教学要求：掌握相关溶液的配制。

（二）碱裂解法小量提取质粒DNA （1人/组）

1．教学内容：提取质粒DNA。

2．教学要求：掌握碱裂解法提取质粒DNA的基本方法。

 (三) 琼脂糖凝胶电泳检测DNA（1人/组）

1．教学内容：电泳基本知识，琼脂糖凝胶的制备方法，DNA的定量。

2．教学要求：学习和掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的原理方法和技术。

（四）DNA的限制性核酸酶切及鉴定（2人/组）

1．教学内容：核酸内切酶相关的知识及其内切酶的性质、使用方法及用量。

2．教学要求：掌握限制性核酸内切酶的原理、作用特性及用途，明确DNA在酶切前后的区别，影响DNA电泳速度的因素。

（五）DNA片段的电泳回收（2人/组）

1．教学内容：DNA片段的割胶回收。

2．教学要求：掌握DNA片段的电泳回收方法。

（六）聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因（1人/组）

1．教学内容：PCR反应体系的配制方法，设置PCR仪的各项参数。

2．教学要求：掌握PCR反应扩增目的基因的基本原理和实验技术。

（七）PCR扩增目的基因片段的回收与纯化（2人/组）

1．教学内容：回收和纯化PCR扩增的DNA片段。

2．教学要求：掌握回收和纯化目的DNA片段的方法和技术。

（八）大肠杆菌感受态细胞的制备（2人/组）

1．教学内容：感受态细胞的制备基础知识及方法，CaCl2法制备 DH5a感受态细胞，计算转化效率。

2．教学要求：掌握大肠杆菌感受态细胞的制备的方法和技术。

（九）目的基因片段与载体的连接和转化（2人/组）

1．教学内容：重组DNA连接，重组产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。

2．教学要求：学会按一定比例用T4噬菌体DNA连接酶进行连接反应，掌握无菌操作方法，掌握大肠杆菌细胞转化的方法和技术。

（十）重组质粒的筛选与鉴定（1人/组）

1．教学内容：质粒及载体（克隆载体，表达载体）等相关的理论知识，蓝白斑筛选的原理，重组克隆子的鉴定方法。

2．教学要求：掌握阳性克隆子的鉴定方法和技术：利用氨苄青霉素抗性、 a互补现象、PCR法、酶切法进行阳性重组子的筛选。

（十一）外源基因在大肠杆菌中诱导表达（2人/组）

1．教学内容：外源基因在大肠杆菌中的诱导表达过程。

2．教学要求：掌握外源基因的诱导表达的特点和方法。

（十二）大肠杆菌中表达蛋白的SDS-PAGE检测（2人/组）

1．教学内容：表达产物的SDS-PAGE电泳分析和检测。

2．教学要求：掌握SDS-PAGE测定蛋白质分子量的基本方法。

四、推荐教材及参考资料

1.推荐教材

《分子生物学实验指导》，魏群编著，高等教育出版社，2006年。

2.参考资料

①　《分子克隆实验指南》，J. 萨姆布鲁克、D.W.拉塞尔著，科学出版社，2006。

②　《精编分子生物学实验指南》，颜子颖等译，科学出版社，1998年。

③　《基因工程实验技术（第二版）》，彭秀玲等编著，湖南科学技术出版社，1997年。

④　《分子生物学实验技术》，郝福英等编著，北京大学出版社，2001年。

⑤　《最新分子生物学实验技术》，梁国栋编著，科学出版社，2001年。

⑥　《现代分子生物学实验原理与技术》，陈德富,陈喜文编著，科学出版社，2006年。

五、实验的考核形式

考核方式：理论考试和实验操作考试；

成绩评定：计分方式：百分制；

学期总评成绩构成【平时考核（40）％；实验操作考核（30）％；实验理论考核（30）％】。其中，平时成绩构成包括考勤考纪、实验操作和实验报告等。

执笔：戴谷